Pesquisa

A popularidade da produção in vitro de embriões (PIVE) tem aumentado substancialmente nos últimos anos, normalmente com a maior parte dos estudos ainda realizados em bovinos. Entretanto, estudos em ovinos são necessários devido a demanda cada vez maior de elevação da produtividade e melhoramento genético desta espécie. O Rio de Janeiro é um dos Estados onde a criação de ovinos encontra-se em expansão. A maturação in vitro (MIV) oocitária consiste numa etapa crucial e limitante para a PIVE, uma vez que o potencial de desenvolvimento oocitário e embrionário está diretamente relacionado à adequada maturação citoplasmática e nuclear. Na PIVE, os oócitos utilizados para MIV são obtidos a partir de folículos em diferentes estágios de desenvolvimento, com diferentes níveis de competência de desenvolvimento. Assim, o bloqueio, reinício e progressão das divisões meióticas assim como as modificações moleculares e estruturais são fundamentais para que o oócito possa finalizar o processo de maturação. O presente projeto propõe-se realizar quatro experimentos. O ensaio 1 tem como objetivo analisar a competência ao desenvolvimento de oócitos oriundos de folículos de diferentes tamanhos e fontes. No ensaio 2 será realizado a análise da maturação citoplasmática e nuclear de CCOs oriundos de folículos de diferentes tamanhos e fontes, a partir de colorações específicas e expressão gênica. O ensaio 3 irá avaliar o efeito de inibidores da progressão meiótica (cilostamida e/ou forscolina) na sincronização da maturação nuclear e citoplasmática. Como complementação ao ensaio 3, o ensaio 4 irá analisar a competência ao desenvolvimento de CCOs submetidos à inibição da progressão. Deste modo, determinar os fatores relacionados à MIV que afetam a competência ao  desenvolvimento de oócitos ovinos oriundos de diferentes fontes (abatedouro e laparoscopia) e de diferentes tamanhos de folículos é fundamental para o progresso científico e biotecnológico, especialmente na espécie ovina.
A indústria da múltipla ovulação e transferência de embrião (MOET) tem se tornado um negócio de escala internacional. A crescente exigência mundial por produção de alimentos seguros e sustentáveis tem demandado o incremento da eficiência reprodutiva e produtiva dos animais. Nosso grupo de pesquisa tem sido pioneiro no desenvolvimento de protocolos de superovulação com base em parâmetros fisiológicos, ovarianos e comportamentais nesta raça. Publicações recentes do grupo (Cavalcanti et al., 2012; Pinna et al., 2012; Varago et al., 2014; Balaro et al., 2014, 2015, 2016; Figueira et al., 2015; Lima et al., 2015), todas com a raça Santa Inês, com foco em acompanhamento e controle do desenvolvimento folicular e luteal, métodos de acasalamento e criopreservação de embriões, mostram   importantes avanços na compreensão dos fatores que interferem na resposta superovulatória. Todavia, em todos os projetos já realizados a coleta cirúrgica foi o procedimento adotado para a recuperação embrionária, devido as particularidades anatômicas da cérvix ovina. O conhecimento gerado recentemente pelo nosso grupo (Brandão et al., 2015 e Fonseca et al., 2015) até este momento apontou para novos, sustentáveis e menos lesivos procedimentos para a transposição da cérvix em ovelhas das raças brasileiras naturalizadas Santa Inês e Morada Nova. Esta proposta é robustecida por pontos estratégicos como o estudo de um biomarcador de resposta à superovulação e a criopreservação. A identificação de animais com resposta satisfatória e constante em sucessivos tratamentos superovulatórios representa um importante avanço e imprime maior eficiência à técnica de Múltipla Ovulação e Transferência de Embrião (MOET). Apesar da aplicabilidade desta informação e dos impactos positivos esperados, pouco tem sido estudado sobre o tema em ovelhas. Encontrando-se correlação entre a repetibilidade na resposta a superovulação e a concentração sérica de Hormônio anti-mülleriano (AMH), a intenção é utilizarmos o perfil sérico de AMH como um biomarcador para seleção de doadoras para participarem de um programa de MOET. Por outro lado, pretende-se também correlacionar as dosagens séricas de AMH com a resposta ao tratamento com eCG e a população folicular. Diante do exposto, a presente proposta tem como objetivo geral estabelecer bases científicas para a resolução de pontos de estrangulamento na técnica de produção in vivo de embriões, focando no desenvolvimento de técnicas inovadoras e sua aplicabilidade imediata a campo, visando um rápido incremento no potencial genético dos nossos animais.
A região Sudeste se destaca no agronegócio caprino leiteiro. Entretanto, o potencial genético e a sazonalidade da produção são entraves na oferta de produtos ao mercado. A múltipla ovulação e transferência de embriões geram ganhos produtivos, porém inconsistentes devido a falhas fisiológicas. Neste contexto, objetivou-se o estudar tópicos na fisiologia reprodutiva de cabras da raça Saanen sob condições tropicais. O ensaio I irá avaliar o ciclo estral de cabras vazias e gestantes por meio de ultrassonografia Doppler colorido e coleta hormonal diária.  O ensaio II tem como objetivo acompanhar a ciclicidade de cabras Saanen com diferentes idades e ordens de parto pelo período de um ano. O ensaio III tem como objetivo avaliar o efeito do estado ovariano previamente ao estímulo superovulatório juntamente com a detecção do potencial intrínseco da doadora de embrião por meio do teste de triagem com eCG seguido do tratamento com FSH.
Existe uma intensa demanda de aumentar a eficiência da produção animal, não só porque tal aumento promoverá o desenvolvimento socioeconômico daquelas pessoas envolvidas direta ou indiretamente no setor agropecuário, mas também porque irá contribuir par aumentar a oferta de alimentos para a população. Existem diversas estratégias e tecnologias para intensificar os sistemas de produção animal, dentre elas estão àquelas associadas à Reprodução Animal. A utilização de hormônios (naturais ou sintéticos) para controlar o ciclo estral dos animais domésticos compõe esta caixa de ferramentas tecnológicas para aumentar a eficiência produtiva dos sistemas de produção.Uma das estratégias que se pode adotar com o uso da IATF é a realização da ressincronização, ou seja, aquelas fêmeas que não ficarem gestantes após o primeiro protocolo de IATF são submetidas a um segundo protocolo (protocolo de ressincronização). Para otimizar esta ferramenta, este segundo protocolo geralmente é iniciado antes mesmo do diagnóstico de gestação. Assim sendo, é possível que em um programa de IATF em ovinos as fêmeas sejam inseminadas a cada 21 dias. Para isso, o protocolo de ressincronização deve ser iniciado no meio da fase luteal, antes mesmo do momento esperado da luteólise natural. Contudo, os efeitos deste segundo protocolo hormonal sobre a atividade do CL precisam ser estudados. Dentro deste contexto, presente estudo tem como objetivo desenvolver e avaliar a eficiência de um protocolo precoce de ressincronização do estro em ovinos associado a um método de diagnóstico precoce da gestação com base na avaliação da vascularização luteal por meio da ultrassonografia com Doppler colorido.
O momento atual exige um esforço conjugado, com as parcerias inter e multidisciplinares no âmbito institucional, para obter recursos para uma melhoria das condições de funcionamento dos diferentes Laboratórios e assim realizar metodologias atuais de diagnóstico que resultem num aumento da capacidade investigativa e na melhora do nível da produção científica dos trabalhos de Pós-Graduação. Neste contexto, o Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária nos últimos anos elaborou projetos para o Edital Pró-equipamentos da Capes e para o Edital Infra-LabPesq da Proppi/UFF os quais possibilitaram a compra de um contador gama (modelo Wizard – Perkin Elmer) e de diferentes aparelhos de ultrassonografia Doppler e de endoscopia, equipamentos estes que possibilitaram a criação dos Laboratórios de Dosagem Hormonal e de Imagem da Universidade Federal Fluminense. Atualmente, estes Laboratórios são utilizados de forma compartilhada por pesquisadores de diferentes Universidades sediadas no Estado do Rio de Janeiro e também por pesquisadores de outros Estados. A presente proposta pretende manter em funcionamento do único Laboratório credenciado junto à Comissão Nacional de Energia Nuclear voltado para a Medicina Veterinária sediado no Estado do Rio de Janeiro que utiliza a tecnologia de radioimunoensaio para realização de dosagens hormonais, bem como consertar e manter o funcionamento dos aparelhos de ultrassonografias. É importante ressaltar que esta técnica de dosagem hormonal é a única aceita pela comunidade científica em animais e a ultrassonografia Doppler constitui uma das mais novas técnicas de avaliação da função ovariana. Estas técnicas proporcionam um grande avanço no entendimento dos eventos fisiológicos nas diferentes áreas da Medicina Veterinária. Assim almeja-se com este projeto a contratação de empresas especializadas para realização da manutenção preventiva e corretiva dos equipamentos presentes nos laboratórios.
Na ovinocultura atual, há uma preocupação cada vez maior com a eficiência reprodutiva, melhoramento genético dos animais e a importância de adequá-los às biotécnicas de reprodução. A criopreservação de gametas (espermatozoides e oócitos) e embriões é uma importante ferramenta dentro das biotecnologias de reprodução assistida. Apesar do potencial em função de seu mecanismo de ação, a literatura ainda é incipiente com relação à suplementação com L-carnitina no meio diluente para a criopreservação de sêmen de qualquer espécie ou na solução de vitrificação para a espécie ovina. Da mesma forma, apesar de já existirem relatos do papel das proteínas anticongelantes (PAC) como agentes crioprotetores, os resultados ainda são poucos e controversos na literatura. Assim, o presente projeto tem como objetivo avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações de L-carnitina e de PAC no meio diluente de sêmen e no meio de vitrificação de embriões ovinos, além de determinar o efeito da técnica de criopreservação (congelamento lento ou vitrificação) na análise qualitativa e quantificação da expressão de genes associados à implantação, preditivos de qualidade embrionária nos períodos pré e periimplantacional. O estudo será realizado em diferentes locais. A obtenção dos embriões e sêmen será realizada Fazenda Escola da Faculdade de Veterinária  da UFF, em Cachoeiras de Macacu, (RJ). As análises espermáticas pós-descongelamento, o cultivo embrionário, avaliações morfológicas e bioquímicas e análise de expressão gênica serão realizadas na Universidade Federal Fluminense, em Niteroi. Dados paramétricos serão submetidos à análise de variância (ANOVA) e Teste de Student-Newman-Keuls (SNK). Dados não paramétricos, serão avaliados pelo teste de Kruskal Wallis seguido de Dunn ou pelo teste Exato de Fisher.
Descrição: A escolha dos métodos de coleta de oócitos mostra-se importante para saber qual deles resultará na maior quantidade de oócitos de boa qualidade, influenciando diretamente na eficiência do seu uso em biotécnicas reprodutivas. Este estudo tem como objetivo determinar a identificação do potencial de recuperação de oócitos de boa qualidade a partir de duas técnicas distintas, em gatas de diferentes genótipos, idades e estágios do ciclo estral. O estudo será conduzido no Hospital Escola de Medicina Veterinária da UNIGRANRIO, em Duque de Caxias/RJ. O Grupo 1 recuperará os oócitos por punção dos folículos (21G), em meio PBS. O Grupo 2 consistirá dos oócitos coletados por fatiamento do ovário. O Grupo 3 recuperará os oócitos pelas duas técnicas citadas acima. Todos os oócitos serão quantificados e avaliados de acordo com sua classificação morfológica em grau I, II, III e IV, de acordo com sua coloração BCB e diâmetro do oócito. A partir deste projeto, será possível comparar as técnicas de aspiração folicular e fatiamento em relação a quantidade e qualidade de oócitos de gatas, correlacionar as fases do ciclo estral de acordo com a morfologia ovariana, identificar se as fases afetam a qualidade do oócito e avaliar se a idade e a raça das fêmeas afetam a qualidade dos oócitos. O estabelecimento do melhor método de coleta de oócitos, facilitará a utilização de outras biotecnologias da reprodução.
Integrantes:  Viviane Lopes Brair – Integrante / Rodrigo Oliveira Cunha – Integrante / Isabela Régis Pereira – Integrante
Descrição: A criação de pequenos ruminantes ao redor do mundo tem tido grande importância ao longo da história, sendo domesticados desde a época bíblica e tendo até pinturas rupestres em cavernas pré-históricas. Considerando o maior grau de tecnificação dos rebanhos existentes na região Sudeste do Brasil, é possível a aplicação de biotecnologias na reprodução, para elevar a produtividade e melhoramento genético dos animais. As biotecnologias mais comumente difundidas no país e no mundo são a Sincronização de estro associada à Inseminação Artificial (IA). Entretanto, para que se tenha sucesso na taxa de gestação após IA, a detecção eficiente do momento da ovulação é crucial nas fêmeas. Inicialmente, há cerca de duas a três décadas atrás, a detecção da ovulação era feita por meio de exame laparoscópico. Entretanto, este é um método muito invasivo, pois submete o animal a um procedimento cirúrgico ou semi-cirúrgico, com todos os cuidados e consequências de uma cirurgia. Desde o advento da ultrassonografia, esta vem substituindo fortemente a laparoscopia, para a realização de alguns procedimentos, como por exemplo a detecção da ovulação. Desta forma, mais recentemente, a detecção do momento da ovulação é quase que em 100% dos estudos realizada por ultrassonografia. Desvantagens da ultrassonografia estão relacionadas ao alto custo do equipamento e dificuldade da aplicação da técnica em pequenos ruminantes pela impossibilidade de palpação retal, como em grandes animais, exigindo grande treinamento prévio dos técnicos. Em função desta particularidade dos caprinos, o exame costuma levar um tempo razoável para cada animal e apresentando grande variabilidade dependendo da maior facilidade ou dificuldade em localizar os ovários em cada fêmea. Sendo assim, apesar de bastante eficiente e, desta forma, ser considerada a técnica de eleição até o presente momento, torna-se necessário a avaliação de novas possibilidades técnicas de identificação do momento da ovulação de forma menos onerosa e mais simples. Sabe-se que o padrão celular vaginal se altera de acordo com o período do ciclo estral e, em cães, utiliza-se o método de citologia vaginal como técnica de eleição para a detecção da ovulação. Os estudos evidenciaram que quando há uma porcentagem maior (acima de 70%) de células anucleadas, o animal está próximo ou no momento da ovulação e a cadela pode ser inseminada. Apesar de existirem alguns relatos de acompanhamento do ciclo estral em pequenos ruminantes pela citologia vaginal, esta técnica nunca foi utilizada em ovinos com o intuito de detectar o momento da ovulação. Até o momento, não se tem estudos em que foi realizado acompanhamento ultrassonográfico associado ao exame citológico, a fim de avaliar de forma fidedigna a eficiência da técnica de citologia como ferramenta de identificação da ovulação em caprinos.. 
Situação: Em andamento; Natureza: Pesquisa. 
Alunos envolvidos: Graduação: (1) . 
Integrantes:  FONSECA, JF – Integrante / Viviane Lopes Brair – Integrante. Financiador(es): Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico – Bolsa.
Nos últimos anos, tem-se observado um crescente interesse em técnicas que possibilitem um maior aproveitamento do material genético oriundo de reprodutores de diferentes espécies. A utilização de biotécnicas de reprodução assistida em cães mostra que esta é uma área em expansão na medicina veterinária. Apesar da espécie canina ser classificada como monoéstrica não estacional, a literatura ainda é incipiente na questão de se avaliar até que ponto as adversidades climáticas podem afetar negativamente os reprodutores de uma determinada raça. Desta forma, o presente projeto tem como objetivo determinar, através de planejamento experimental, a influência das quatro estações do ano nas características seminais de cães de diferentes raças na região do Grande Rio. O estabelecimento do padrão seminal ao longo do ano nestas raças pode orientar o criador sobre medidas adicionais a serem implementadas a fim de se garantir a máxima fertilidade de reprodutores. O estudo será conduzido no Hospital Veterinário da Universidade do Grande Rio, em Duque de Caxias/RJ. Serão utilizados sete machos caninos da raça Chihuahua e quatro da raça Husky Siberiano.. 
Situação: Em andamento; Natureza: Pesquisa. 
Integrantes:  Jessika da Silva Silveira – Integrante / Clara Vieira de Souza – Integrante.
Financiador(es): BANCO SANTANDER (BRASIL) S.A. – Bolsa / FAPERJ – Bolsa.

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